NY/T 3748-2020 标准解读

一、标准适用范围与执行边界

• 适用主体：持证种子企业、农业检测机构、科研单位及品种审定部门
• 适用场景：水稻常规稻种与杂交稻种纯度鉴定，涵盖生产田间、种子库及流通环节抽样检测
• 排除条件：转基因品种检测不适用；SSR标记位点缺失或突变导致无法扩增的特殊材料除外

二、核心实操技术要求

1. 样本采集
   1. 常规稻种：按GB/T 3543.2执行，单样本量≥200粒
   2. 杂交稻种：单样本量≥100粒，需区分父本母本标记特征
2. DNA提取
   1. 采用CTAB法或商业化试剂盒，OD_260/280比值控制在1.8-2.0
   2. 终浓度≥50ng/μL，4℃保存不超过7天
3. SSR扩增体系
   1. 总反应体积10μL：含2×Taq Master Mix 5μL，正反向引物各0.4μM，模板DNA 1μL
   2. 扩增程序：94℃预变性5min；35循环（94℃ 30s，55-60℃退火30s，72℃延伸45s）；72℃终延伸10min
4. 电泳检测
   1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶（8%浓度），恒压150V电泳2h
   2. 银染显色：硝酸银溶液浸泡15min，显影液至条带清晰
5. 结果判定
   1. 纯度≥99.0%（常规稻）、≥96.0%（杂交稻）为合格阈值
   2. 异常带型复检三次，两次异常则判定为混杂个体

三、典型业务场景应用案例

四、实操难点与解决方案